國標GB14922－2022 中大鼠小鼠病毒檢測項目

國標GB14922－2022中大小鼠的病毒必須檢測項目如下：

Ⅲ型呼腸孤病毒Reo-3、仙臺病毒SV、小鼠肝炎病毒MHV、漢坦病毒HANT、小鼠肺炎病毒PVM、小鼠細小病毒MVM、大鼠細小病毒KRV、大鼠細小病毒H-1。

國標GB14922－2022中大小鼠的病毒必要時檢測項目如下：

淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒LCMV、大鼠冠狀病毒RCV、鼠痘病毒Ect、小鼠腦脊髓炎病毒TMEV、多瘤病毒POLY。

小鼠諾如病毒MNV是免疫缺陷小鼠的必須檢測項目。

以上病毒大多數病毒是RNA病毒，但是小鼠細小病毒MVM、大鼠細小病毒、鼠痘病毒Ect、多瘤病毒POLY是DNA病毒。

常用病毒檢測方法

常規樣本的病毒檢測方法，多采取血清學方法，GB14922中對各種病毒的檢測有詳細的描述，包括病毒抗原制備、抗體標記，以及檢測流程及結果讀取。血清學檢測方法包括：酶聯免疫吸附試驗ELISA，免疫酶試驗IEA，免疫熒光試驗IFA等抗體檢測方案。抗體檢測的缺點是無法區分當前感染還是既往感染，也不能用作診斷免疫缺陷小鼠（無法產生抗體）和病毒早期感染（抗體還未產生），容易導致漏檢。但是可以了解既往感染史。

除此之外，隨著分子生物學檢測方法的進步，熒光定量PCR成為用于檢測病毒感染的常用的方法。其中RNA病毒需要進行額外的逆轉錄過程轉為DNA，再進行后續的檢測。熒光定量PCR檢測是通過檢測熒光信號的強弱來判斷是否存在病毒或病毒含量的高低。不同的熒光標記物也使得多重檢測成為可能，比如一個反應體系內可見檢測多重熒光FAM、HEX、ROX 熒光，每種熒光探針標記1-3種病毒，從而可以實現一個孔中多種病毒的檢測。

熒光定量PCR檢測病毒時所需的樣本量少、更是可以在疾病早期檢測到病毒感染，特異性高，也得到了廣泛的應用和重視。核酸PCR檢測需要防污染措施。首先針對特定核酸區段，設計特異性的病原體檢測引物，確保都能精準識別目標病原體，有效避免非特異性擴增帶來的假陽性。具體的樣本檢測過程需要設置陽性對照，可通過觀察陽性對照的擴增曲線，判斷qPCR過程是否正常。翼和生物開發的大小鼠病原體qPCR檢測試劑盒可同時檢測多種病毒。分兩種試劑盒，一種qPCR試劑盒是聯檢試劑盒，能判斷樣本是否感染國標規定的幾種病毒，并且出現陽性的話可鎖定在2-3種病毒的范圍，但是確定具體哪種病毒感染則需要搭配鑒定試劑盒進行具體病毒的鑒定。但是一般SPF來源的鼠樣本都是比較干凈，檢測常為陰性，所以無需進行特定病毒的鑒定。聯檢試劑盒：國標病毒必檢八項、國標病毒選檢六項。聯檢試劑盒中一個熒光通道可以同時檢測2-3種病毒體，但是不區分這2-3種病毒，也就是說一旦這個熒光通道有信號陽性，那么這2-3種病原體都有可能是陽性。5款鑒定試劑盒。鑒定試劑盒中一個熒光通道只鑒定一種病毒，所以可以通過熒光通道直接判斷感染的具體病毒。

熒光定量PCR檢測靈敏度高、特異性強，一般高于10 copies/μl的核酸病毒樣本可被檢測到。

一旦實驗動物自身攜帶一些病毒，不僅可能導致實驗數據失真，還可能造成大量科研資源的浪費，構建一套高效、精準的實驗動物質量檢測和管理體系，是保障動物實驗正常進行的重要環節。